【產(chǎn)品名稱】:大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白試劑盒

【敏感性】： ＜5pg/ml

【特異性】： 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。

【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]

【有效期】： 12個月（-20℃）。

【用途】： 用于體外定量分析液體標本（通用型）。

標本收集:

1.血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內(nèi)于 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。

3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

4. 標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。

5.標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復凍融，1-6月內(nèi)檢測,4℃保存的應在1周內(nèi)進行檢測。

6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標準品值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋（建議先做預實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。

試驗所需自備物品:

1.  酶標儀（450nm波長濾光片）

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水

4.  吸水紙

檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正�，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應為室溫。

3.  標準品: 加入標準品&標本稀釋液1.0ml至凍干標準品中，靜置10分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

4. 生物素化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制100-200μl。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μl/孔計），實際配制時應多配制  100-200μl。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當日使用。

洗滌方法:

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白試劑盒操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。

7、 每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

9、 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

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更新時間：2024/11/20 9:12:04