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上海恒遠(yuǎn)分享整理：酶的細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)過(guò)程

閱讀次數(shù)：1100 發(fā)布時(shí)間：2014/3/14 10:32:35

又是一個(gè)周五，時(shí)光飛逝，還記得上個(gè)星期的這個(gè)時(shí)候，我們?yōu)榕笥褌兎窒淼氖且粋€(gè)用TRIzol索取RNA的方法步驟。今天我們要給朋友們說(shuō)的也是一個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，其相關(guān)于酶的細(xì)胞。下面我們就來(lái)看一看上海恒遠(yuǎn)分享整理：酶的細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)過(guò)程。

在一定條件下，使組織細(xì)胞內(nèi)的酶與其底物相互作用，形成初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物，再用捕捉劑在酶的作用部位進(jìn)行捕捉，使其在顯微鏡下可見。

反應(yīng)的過(guò)程如圖下所示：

我們通過(guò)圖中式可見，酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)實(shí)際上由兩項(xiàng)反應(yīng)組成。前面的酶反應(yīng)相當(dāng)于細(xì)胞內(nèi)自然條件下發(fā)生的酶促反應(yīng)，后面的捕捉反應(yīng)則是為了使酶反應(yīng)可見而人為造成的。捕捉反應(yīng)的目的是使酶反應(yīng)產(chǎn)物形成在顯微鏡下可見的*終反應(yīng)產(chǎn)物，即*終反應(yīng)產(chǎn)物在光鏡下具有鮮明顏色，在電鏡下具有高電子密度。捕捉反應(yīng)主要有金屬鹽沉淀法、色素形成和嗜鋨物質(zhì)生成法。

在實(shí)驗(yàn)中我們要準(zhǔn)備好樣品的制備：

酶細(xì)胞化學(xué)的一個(gè)重要問(wèn)題是既要保存好細(xì)胞內(nèi)酶的活性，又要保存好細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，因此選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┓N類、濃度、固定的方式和時(shí)間是細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的一個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題。光鏡樣品固定多選用中性福爾馬林或多聚甲醛,4℃、24小時(shí)，常規(guī)的石蠟包埋切片可以滿足相當(dāng)一部分酶的細(xì)胞化學(xué)要求；電鏡樣品固定通常用0.5～2％戊二醛或4％多聚甲醛,4℃、2小時(shí)，再切成5～100μm的厚片用于細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)后經(jīng)常規(guī)的鋨酸后固定，脫水、包埋、超薄切片、至電鏡下觀察。冷凍切片能較大限度地保存酶的活性，因此是光、電鏡酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中常用的方法。

酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)實(shí)際上就是孵育反應(yīng)的過(guò)程，孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉劑，保證孵育液pH 的緩沖液以及有關(guān)的添加劑等。孵育的溫度和時(shí)間可根據(jù)不同的酶和組織通過(guò)實(shí)驗(yàn)而確定。電鏡酶細(xì)胞化學(xué)的樣品在孵育反應(yīng)后需經(jīng)鋨酸后固定、梯度乙醇脫水、環(huán) 氧樹脂包埋和超薄切片，至電鏡下觀察。

基本實(shí)驗(yàn)過(guò)程式：

酶的細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)過(guò)程到這里就結(jié)束了，您在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中也要注意一些細(xì)節(jié)問(wèn)題。這里是上海恒遠(yuǎn)生物，我公司的產(chǎn)品質(zhì)量可靠，進(jìn)口、過(guò)程，專業(yè)代理。您在實(shí)驗(yàn)我公司產(chǎn)品的同時(shí)，有任何問(wèn)題都可以來(lái)電咨詢我公司業(yè)務(wù)員，我們會(huì)時(shí)間為您解決，不論是產(chǎn)品還是實(shí)驗(yàn)技術(shù)。