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2．取編號(hào)為A、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶。首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中，置溫箱中靜止培養(yǎng)5～20分鐘后，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液，再接種入B培養(yǎng)瓶中后，向A瓶中補(bǔ)充少許完全培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

3．培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5～20分鐘后，按處理A的方法，把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中，再向B瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基。

3）消化排除法

1．先是用0.5％胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養(yǎng)基細(xì)胞一次，然后再換成新的混合繼續(xù)消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，到半數(shù)細(xì)胞脫落下來(lái)后，便立即停止消化。

2．把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng)，向原瓶?jī)?nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后，成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落，經(jīng)過(guò)幾次反復(fù)處理，可能把成纖維細(xì)胞除凈。

4）膠原酶消化法

1．可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后，即終止消化。

2．用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，可獲純凈腫瘤細(xì)胞。如成纖維細(xì)胞未被除凈，可再次重復(fù)。

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