可塑性成年細胞的分化可能有巨大的治療潛力，但在同一時間，它的特點是發(fā)展的嚴重的病理狀態(tài)，如癌癥和纖維化。在這項研究中，我們報告中的應用無創(chuàng)性系統(tǒng)的實時動態(tài)監(jiān)測細胞的可塑性。分析細胞阻抗剖面記錄細胞指數(shù)使用實時細胞分析儀發(fā)現(xiàn)其顯著增加治療后前列腺上皮細胞的轉(zhuǎn)化生長因子-β1。變化的細胞指數(shù)剖面平行細胞骨架改建和誘導上皮細胞–間過渡和細胞增殖的負相關(guān)。這種新穎的應用這種方法表現(xiàn)出極大的潛力的阻抗為基礎的系統(tǒng)的無創(chuàng)性和實時監(jiān)測細胞的命運。

關(guān)鍵詞：實時細胞分析細胞可塑性上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)型- -–轉(zhuǎn)化生長因子-β1 - F -肌動蛋白細胞骨架重構(gòu)

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景區(qū)簡介

這一現(xiàn)象的可塑性成年細胞的分化可能有巨大的治療潛力，但在同一時間，它的特點是嚴重的病理狀態(tài)惡化。上皮間過渡–（IMT）是一個關(guān)鍵過程的胚胎發(fā)育，但它也發(fā)生在進展腫瘤來源于上皮細胞（審查，見（1））。轉(zhuǎn)化生長因子- 1（ββ轉(zhuǎn)化生長因子- 1）是一個重要的生長因子誘導重塑的上皮細胞。轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導一個復雜的變化的基因表達譜，從而導致誘導細胞周期阻滯，增加細胞遷移，擴散（2–4）。一般來說，確定質(zhì)量和數(shù)量的重構(gòu)的上皮細胞是一個復雜的問題。它通常包括定量表達的上皮細胞和間質(zhì)標記（E -鈣粘蛋白，神經(jīng)鈣粘著蛋白，波形蛋白和），可視化骨架重建（F），遷移，入侵檢測（傷口愈合和移民通過基底膜基質(zhì)；（5））。傳統(tǒng)上，大多數(shù)的方法是根據(jù)費時終點狀態(tài)分析整個細胞群，結(jié)合的技術(shù)分析單個細胞，利用流式細胞儀或數(shù)字顯微技術(shù)和圖像分析。然而，無論是情節(jié)和空間分辨率這些技術(shù)能夠登記非常小的、快速的細胞形態(tài)的變化。目前，標記和無創(chuàng)性方法的基礎上的電子傳感器陣列細胞提出了監(jiān)測細胞生理學，尤其是粘附，傳播，和瞬態(tài)變化，細胞形態(tài)（6–9）。廣泛接受這一方法，正確和準確地解釋這些數(shù)據(jù)的測量是至關(guān)重要的獲得精確的相關(guān)性細胞形態(tài)和表型相關(guān)的整體使用參考方法。然而，良好的描述模型應用這一方法，不同的細胞系和各種細胞的可塑性調(diào)節(jié)的條件是失蹤。在這里，我們表明，阻抗為基礎的實時細胞分析儀（美）允許動態(tài)監(jiān)測和定量細胞重塑在轉(zhuǎn)化生長因子- 1在β上皮轉(zhuǎn)化前列腺上皮細胞。這種新穎的應用這種方法表現(xiàn)出極大的中型吞吐量潛力的阻抗為基礎的系統(tǒng)的無創(chuàng)性和實時監(jiān)測細胞的命運。

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材料與方法

細胞的

1細胞取自德國微生物和細胞培養(yǎng)和培養(yǎng)在1640培養(yǎng)，輔以20%胎牛血清（兩部分），5 µ克/毫升5毫微克/毫升的轉(zhuǎn)鐵蛋白，亞，和5 µ克/毫升胰島素（公司）。該細胞系培養(yǎng)情報（熱費科學）培養(yǎng)瓶，盤菜，在加濕的孵化器在37攝氏°大氣中5%的二氧化碳。

實時細胞阻抗分析

協(xié)會e-plates®96被用于無創(chuàng)實時測量與使用一個xcelligence時系統(tǒng)包括一軟件版本1.1（包括羅氏）。，標準的背景進行測量是利用100μ我完整的栽培介質(zhì)。1細胞培養(yǎng)，量化，和種子中額外的100μ我種植媒體在終濃度為30000細胞每平方厘米。細胞不斷監(jiān)測每1分鐘在個45分鐘后播種，每1小時為96小時內(nèi)重組轉(zhuǎn)化生長因子-β1（微孔）處理不同濃度一式三份進行24小時后播種的細胞。形成收縮微絲阻斷細胞松弛素乙（炭黑），用dematioideum（calbiochem）溶解在甲醇