實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞簡(jiǎn)介,有助于了解基本的細(xì)胞信息,非常有用!
一、CHO-K1細(xì)胞
CHO-K1細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)中非常常用的一個(gè)細(xì)胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。該細(xì)胞株培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單,貼壁強(qiáng)度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來(lái)研究一般哺乳動(dòng)物基因的功能。
來(lái)源:Cricetulus griseus (中國(guó)倉(cāng)鼠) 卵巢
形態(tài):表皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁
注釋:CHO-K1由CHO衍生而來(lái),CHO是T. T. Puck 在1957年從一只成年中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢獲得的。
培養(yǎng)液:Ham's F12K (含2 mM L-谷氨酰胺,1.5 g/L NaHCO3), 10% 胎牛血清。
傳代:吸去培養(yǎng)液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會(huì)抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘,直到細(xì)胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液,用移液器把細(xì)胞吹散。加適量的細(xì)胞到新的培養(yǎng)器皿中。(以1:4到1:8為宜,傳代期間培養(yǎng)液更換1-2次)
凍存:95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
二、293細(xì)胞
293細(xì)胞比較容易轉(zhuǎn)染,是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。293細(xì)胞的一個(gè)衍生株:293T/17的轉(zhuǎn)染效率更高,成為廣大研究者研究基因功能的一個(gè)強(qiáng)大工具。
293細(xì)胞的缺陷是生長(zhǎng)過(guò)程中貼壁強(qiáng)度比較小。所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易流失,從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果一個(gè)實(shí)驗(yàn)室新得到的293細(xì)胞是郵寄得到的并且細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中,就需要讓細(xì)胞沉降幾天時(shí)間,因?yàn)榇罅考?xì)胞會(huì)漂浮在培養(yǎng)液里。
來(lái)源:人體腎臟
形態(tài):上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁
注釋:該細(xì)胞含腺病毒5 DNA 。
培養(yǎng)液: MEM( 含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉), 10% 馬血清(熱滅活)。
傳代: 吸去培養(yǎng)液。用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會(huì)抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘,直到細(xì)胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液,用移液器把細(xì)胞吹散。加適量的細(xì)胞到新的培養(yǎng)器皿中。(以1:2到1:4為宜,傳代期間培養(yǎng)液2-3天更換1次)
凍存:95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
三、vero細(xì)胞
Vero細(xì)胞被成功的用來(lái)培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗,在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻(xiàn),在醫(yī)藥研究中廣泛應(yīng)用。
來(lái)源: 非洲綠猴腎細(xì)胞
形態(tài):上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁
注釋:該細(xì)胞是日本千葉大學(xué)的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日從一只正常的成年非洲綠猴腎組織培養(yǎng)出來(lái)的。
培養(yǎng)液:MEM( 含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS,1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉), 10%胎牛血清
傳代:吸去培養(yǎng)液。用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會(huì)抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘,直到細(xì)胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液,用移液器把細(xì)胞吹散。加適量的細(xì)胞到新的培養(yǎng)器皿中。(以1:3至1:6為宜,傳代期間培養(yǎng)液每周更換2-3次)
凍存: 95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
四、NIH-3T3細(xì)胞
NIH-3T3細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室常用來(lái)做轉(zhuǎn)染及基因表達(dá)的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。
來(lái)源: Mus musculus(小家鼠)胚胎
形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:貼壁
注釋:為得到適合轉(zhuǎn)染得細(xì)胞株,NIH-3T3細(xì)胞至少連續(xù)克隆過(guò)5次。NIH-3T3細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染DNA,鼠痘病毒陰性。
培養(yǎng)液:DMEM(含4mM L-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氫鈉),10%小牛血清
傳代:吸去培養(yǎng)液。(不要讓細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)器皿,長(zhǎng)滿80%為宜)用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次,以去除血清(血清會(huì)抑制胰酶的活性)。加2-3毫升Trypsin-EDTA,放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘,直到細(xì)胞全部脫落。加6-8毫升培養(yǎng)液,用移液器把細(xì)胞吹散。加適量的細(xì)胞到新的培養(yǎng)器皿中。(以3-5x103/cm2為宜,傳代期間培養(yǎng)液每周更換2次)
凍存: 95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。
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