近年來,國產(chǎn)的elisa試劑盒在實(shí)驗(yàn)室中也開始逐漸普及,而絕大多數(shù)是用來檢測未知樣本中抗原的濃度。選擇我公司的試劑盒產(chǎn)品可提供技術(shù)指導(dǎo)及零費(fèi)用ELISA試劑盒代測服務(wù),相對來說,比自己慢慢摸索條件快得多,不僅可以讓實(shí)驗(yàn)更便利,還能夠更加精確。 在ELISA實(shí)驗(yàn)中常會(huì)遇到這些問題:
1. 溫育條件不一致,上海恒遠(yuǎn)建議:恒溫箱溫育較水浴顯色深,OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱。如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃。
2. 樣品數(shù)量不一,加樣時(shí)間長短不一。當(dāng)重復(fù)某一樣品時(shí),加樣時(shí)間盡可能與次接近。
考慮到有些客戶沒有實(shí)驗(yàn)設(shè)備,我公司還可以提供代測服務(wù),只需付試劑盒的費(fèi)用,代測是免費(fèi)的哦!代測方法主要采用這五大方法:
一、直接法
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。 1. 優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
2. 缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對進(jìn)步。
二、間接法
此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級抗體去辨識(shí)一級抗體來測定抗原量。
1. 優(yōu)勢:二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號(hào)的一級抗體則能保存它*多的免疫反響性。
2. 缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
三、雙抗體夾心法
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶符號(hào)后直接測定抗原的量;或不符號(hào),再透過酶符號(hào)的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。
1. 優(yōu)勢:高活絡(luò)、高專一性,抗原無須事前純化。
2. 缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。
四、競爭法
樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就能夠聯(lián)系越多的抗體,而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
1. 優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
2. 缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
五、根據(jù)細(xì)胞法(*新ELISA技術(shù))
是一種新的定性蛋白檢測技術(shù),將細(xì)胞直接在微孔板里培育,待檢測時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
1. 優(yōu)勢:無需裂解細(xì)胞,所以方針蛋白丟失*少,可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
2. 缺陷:不能測定抗原量。
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