elisa試劑盒檢測(cè)步驟及注意事項(xiàng)

操作步驟：
用于檢測(cè)未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
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加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）
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于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml， 　　37℃孵育30-60分鐘，洗滌,*后一遍用DDW洗滌。
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加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
     ↓
終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
     ↓
結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

注：
1.
用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2.
每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，
該孔不加任何試劑，
只是*后加底物溶液及
2N
H2SO4
。
測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)
OD
值至零。
3.
為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4.
未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于
2-8
℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過
氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、
生
物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5.
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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